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細胞生長曲線的繪制實驗報告

時間:2020-10-07 17:37:45 報告 我要投稿

細胞生長曲線的繪制實驗報告范文

  篇一:實驗五 微生物生長量的測定及生長曲線的繪制

細胞生長曲線的繪制實驗報告范文

  一、實驗?zāi)康?/strong>

  學(xué)習了解微生物生長量測定的方法

  學(xué)習了解細菌生長曲線的繪制方法

  學(xué)習掌握血細胞計數(shù)板的使用方法

 。ㄒ唬┪⑸锷L量的測定

  計數(shù)法 重量法 生理指標法

  1、顯微鏡直接計數(shù)法

  (1)利用血細胞計數(shù)板計數(shù)

 。2)涂片計數(shù)

  2、活菌菌落計數(shù)法

  3、濾膜法

 。ǘ┘毦L曲線

  將單細胞細菌接種到恒定容積的液體培養(yǎng)基中,不補充營養(yǎng)物或移去培養(yǎng)物,細菌以二分裂方式繁殖,以時間為橫坐標,細菌數(shù)目的對數(shù)值為縱坐標,可畫出一條反映細菌在整個培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線,稱為生長曲線(growth curve)

  篇二:細胞生長曲線的測定

  細胞生長曲線的測定

  一、實驗?zāi)康?/strong>

  掌握測定細胞生長曲線的.方法。

  二、實驗器具

  24孔細胞培養(yǎng)板、微量加樣器、eppendorf管、吸頭、吸頭盒、顯微鏡、細胞計數(shù)板、載玻片、蓋玻片、吸管、試管架、普通顯微鏡、細胞懸液、0.4%臺盼藍。

  三、實驗方法

  1. 培養(yǎng)細胞:首先在24孔細胞培養(yǎng)板內(nèi)分別接種相同數(shù)量的細胞,計數(shù)并記錄接種的細胞懸液密度,接種時間記為0小時。

  2. 計數(shù)細胞密度:從接種時間算起,每隔24小時計數(shù)3孔的細胞密度,算出平均值。為提高準確率,對每孔細胞可計數(shù)2-3次,如此操作至第七天結(jié)束。

  3. 繪制曲線:以培養(yǎng)時間為橫坐標、細胞密度為縱坐標,將全部結(jié)果在坐標紙上繪圖,即得所培養(yǎng)細胞的生長曲線。

  篇三:MTT法繪制生長曲線

  實驗材料:

  1,5%FBS-L-DMEM, 5x104個/ml細胞懸液,5mg/mlMTT溶液,DMSO,0.01M PBS,2,  96孔板共7個,酶標儀,50ml離心管,1.5ml離心管,0.22μm濾膜,錫箔紙,MTT工作液(1ml/管)

  實驗步驟:

  1, 分別選取生長良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細胞懸液,調(diào)整細胞密度為5x104/ml。接種到96孔板,每孔接種200μl細胞懸液進行培養(yǎng)(每孔1x104細胞)。

  2, 培養(yǎng)16-48后,每天選擇6個培養(yǎng)孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃繼續(xù)孵育。

  3, 孵育4h后終止培養(yǎng),吸出孔內(nèi)上清,此時應(yīng)該傾斜96孔板,用槍頭小心的將上清液吸去,不可吸去下面的結(jié)晶顆粒,慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min,使結(jié)晶充分溶解,于試驗孔平行設(shè)不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照1孔。

  注意事項:

  【1】  1, 兩種方法分離小型豬骨髓間充質(zhì)干細胞的比較

  分別取兩組0,1,3代細胞,制成1x103的細胞懸液,接種到96孔板,每孔細胞懸液200微升,置37℃、5%CO2飽和濕度孵箱內(nèi)孵育,各組每24小時分別取出4孔,每孔加入MTT(2mg/ml)20微升 37℃孵育,4h后吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)液,每孔加入150微升分析純的二甲基亞砜,移至酶聯(lián)免疫檢測儀上振蕩10min,用分光光度計在492nm波長處測定每孔的吸光度值(OD492),以O(shè)D(492)值為縱坐標,時間為橫坐標繪制生長曲線

  【2】 來自:SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)的實驗研究

  大鼠MSCs生長曲線測定:為了定量測定大鼠BMSCs的生長狀況,對來源于同一動物的原代細胞進行連續(xù)培養(yǎng)。分別選取生長良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制備成細胞懸液,調(diào)整細胞密度為5x104/ml。接種到96孔板,每孔接種200μl細胞懸液進行培養(yǎng)(每孔1x104細胞)。次日起每天選擇6個培養(yǎng)孔各自加入MTT溶液(5mg/ml)20μl,37℃繼續(xù)孵育4h后終止培養(yǎng),吸出孔內(nèi)上清,每孔加入150μlDMSO,室溫振蕩10min,使結(jié)晶充分溶解,于試驗孔平行設(shè)不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照1孔。在酶標儀上選擇570nm波長,以空白孔調(diào)零,測定各孔吸光度(A)值,連續(xù)測7天,以時間為橫軸,A值為縱軸繪制細胞生長曲線。

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